Bab III Prak.SBOA

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1         Waktu dan Tempat

Praktikum ini dilakukan di Laboratorium Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Halu Oleo dan dilaksanakan mulai bulan Oktober 2013 – Desember 2013.

3.2         Alat dan Bahan

3.2.1   Alat

Alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini yaitu: satu set alat destilasi (Duran-Germany), penguap berputar vakum/ vacuum rotary evaporator (IKA-Werke RV 05 Germany), oven (Gallenkamp Civilab-Australia), timbangan analitik (Explorer Ohaus), plat KLT, pipet tetes, botol plakon, kertas saring biasa dan whatman No.1, wadah plastik (jerigen), wadah kaca (Topeles), pisau, lampu UV (Srahlen Germany), chamber, kaca, cutter, spatula, pinset, mistar, aluminium foil, penotol/pipa kapiler, gelas ukur (Pyrex), hot plate, kuvet, spektronik 20D dan spektrofotometer IR.

3.2.2   Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam percobaan ini rimpang jahe (Zingiber officinales), rimpang temulawak (Curcuma xanthorriza), buah pare (Momordica chanrantia L), rimpang lengkuas (Languas galanga), seledri (Apium graveolens), daun jambu biji (Psidium guajava), baku kurkumin, metanol (teknis), etanol (teknis), etil asetat (teknis), n-heksana (teknis), diklorometan (teknis), kloroform p.a (E. Merck), silika gel 60 GF₂₅₄ p.a (E. Merck), akuades, serium sulfat (CeSO₄) 2% dalam H₂SO₄ 2%., dan Kalium Bromida(KBr).

3.3         Prosedur Kerja

3.3.1        Penyiapan Simplisia

Tanaman obat yang digunakan sebagai bahan dalam penelitian adalah :

1)   Seledri (Apium graveolnes)

Bahan baku tanaman seledri diperoleh dari desa SP 5 kecamatan Palangga, Konawe selatan. Tanaman in merupakan tanaman budidaya.

·      Pemanenan: waktu pemanenan seledri dilakukan pada tanggal 19 oktober 2013, pukul 16.15 WITA, umur tanaman sekitar 3 bulan dan  diambil dari bagian pelepah sampai ke daun dengan cara manual yaitu dipetik menggunakan tangan.

·      Sortasi basah: sortasi basah dilakukan dengan memisahkan bagian tanaman yang bagus dan tanaman yang sudah tidak bagus lagi.

·      Pencucian: tanaman dicuci dengan menggunakan air mengalir dan dibersihkan dari tanah dan pengotor lainnya yang melekat pada tanaman seledri.

·      Penirisan/pengeringan:Setelah pencucian, bahan langsung ditiriskan di rak-rak pengering selama beberapa jam. Selesai pengeringan dilakukan kembali penyortiran

·      Perajangan dilakukan dengan memotong atau mengiris iris tanaman dengan ukuran yang sama dan tipis. Perajangan bahan dapat dilakukan secara manual dengan pisau yang tajam dan terbuat dari steinlees ataupun dengan mesin pemotong/ perajang. Setelah itu ditimbang, setengah dari simplisia ini kemudian dikeringkan.

·      Pengeringan daun seledri dilakukan dengan menjemur  tanaman dengan menutupinya menggunakan kain hitam. Sehingga tidak terkena langsung dengan sinar matahari dan terhindar dari cemaran debu dan senyawa lain. Pengeringan ini dilakukan selama 3 hari, dan setelah kering ditimbang.

·      Sortasi kering  dilakukan memisahkan simplisia dengan debu krikil dan benda lain. Setelah itu sampel ditimbang.

2)   Jahe (Zingiber officinales)

Bahan baku tanaman temulawak diperoleh dari desa Sumber Sari kecamatan Moramo. Tanaman ini merupakan tanaman Budidaya.

·      Pemanenan: pemanenan tanaman jahe dilakukan pada umur 10 bulan pada musim kemarau pukul 08.00 WITA. Tanaman jahe diambil rimpangnya dengan cara menggali tanah dengan alat besi (Cangkul) tanpa menyentuh rimpang tanaman dan menarik batang tanaman. Rimpang temulawak yang tersisa ditanah diambil dan dikumpulkan.

·      Sortasi basah: sortasi basah dilakukan dengan memisahkan rimpang jahe dengan tanahdan bagian rimpang yang busuk.

·      Pencucian: Rimpang dicuci dengan menggunakan air mengalir dan dibersihkan dari tanah yang melekat pada rimpang.

·      Penirisan/pengeringan:Setelah pencucian, bahan langsung ditiriskan di rak-rak pengering. Bahan rimpang penjemuran dilakukan  selama beberapa jam. Selesai pengeringan dilakukan kembali penyortiran

·      Perajangan dilakukan dengan memotong atau mengiris iris tanaman dengan ukuran yang sama dan tipis. Perajangan bahan dapat dilakukan secara manual dengan pisau yang tajam dan terbuat dari steinlees ataupun dengan mesin pemotong/ perajang.  Bentuk irisan split atau slice.Setelah itu rimpang ditimbang, setengah dari simplisia ini kemudian dikeringkan.

·      Pengeringan rimpang temulawak dilakukan dengan menjemur tanaman dengan menutupi rimpang menggunakan kain hitam. Sehingga tidak terkena langsung dengan sinar matahari dan terhindar dari cemaran debu dan senyawa lain . Pengeringan inidilakukan selama 5 hari, dan setelah kering ditimbang.

·      Sortasi kering  dilakukan memisahkan simplisia dengan debu krikil dan benda lain. Setelah itu sampel ditimbang.

3)   Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb)

Bahan baku tanaman temulawak diperoleh dari desa Wonua Sari kecamatan Mowila Konawe selatan. Tanaman ini merupakan tanaman liar yang tumbuh di perkebunan.

·      Pemanenan: Tanaman temulawak diambil rimpangnya dengan cara menggali tanah dengan alat besi(linggis dan Cangkul) tanpa menyentuh rimpang tanamn  dan menarik batang tanaman. Rimpang temulawak yang tersisa ditanah diambil dan dikumpulkan.

·      Sortasi basah: sortasi basah dilakukan dengan memisahkan rimpang temulawak dengan tanahdan bagian rimpang yang busuk.

·      Pencucian: Rimpang dicuci dengan menggunakan air mengalir dan dibersihkan dari tanah yang melekat pada rimpang.

·      Penirisan/pengeringan:Setelah pencucian, bahan langsung ditiriskan di rak-rak pengering. Bahan rimpang penjemuran dilakukan selama beberapa jam. Selesai pengeringan dilakukan kembali penyortiran

·      Perajangan dilakukan dengan memotong atau mengiris iris tanaman dengan ukuran yang sama dan tipis. Perajangan bahan dapat dilakukan secara manual dengan pisau yang tajam dan terbuat dari steinlees ataupun dengan mesin pemotong/ perajang.  Bentuk irisan split atau slice.Setelah itu rimpang ditimbang, setengah dari simplisia ini kemudian dikeringkan.

·      Pengeringan rimpang temulawak dilakukan dengan menjemurtanaman dengan menutupi rimpang menggunakan kain hitam. Sehingga tidak terkena langsung dengan sinar matahari dan terhindar dari cemaran debu dan senyawa lain. Pengeringan inidilakukan selama 5 hari, dan setelah kering ditimbang.

·      Sortasi kering  dilakukan memisahkan simlplisia dengan debu krikil dan benda lain. Setelah itu sampel ditimbang.

4)   Pare (Momordica chanrantia)

Bahan baku tanaman temulawak diperoleh dari desa Kusambi kecamatan Kusambi, Raha. Tanaman ini merupakan tanaman budidaya dengan umur panen 2 bulan.

·         Pemanenan: Pemanenan buah pare pada pagi hari pukul 08.10.Buah pare diambil dengan cara manual yaitu dipetik dengan tangan.

·      Sortasi basah: sortasi basah dilakukan dengan memisahkan buah yang berbeda warnanya serta memisahkan antara buah yang layak dan busuk.

·      Pencucian: buah pare dicuci dengan menggunakan air mengalir.

·      Penirisan/pengeringan:Setelah pencucian, bahan langsung ditiriskan di rak-rak pengering. Penjemuran buah dilakukan  selama beberapa jam. Selesai pengeringan dilakukan kembali penyortiran

·      Perajangan dilakukan dengan memotong atau mengiris iris tanaman dengan ukuran yang sama dan tipis. Perajangan bahan dapat dilakukan secara manual dengan pisau yang tajam dan terbuat dari steinlees ataupun dengan mesin pemotong/ perajang.  Bentuk irisan split atau slice.Setelah itu rimpang ditimbang, setengah dari simplisia ini kemudian dikeringkan.

·      Pengeringan buah pare dilakukan dengan menjemur tanaman di bawah sinar matahari dengan menutupinya menggunakan kain hitam. Sehingga tidak terkena langsung dengan sinar matahari dan terhindar dari cemaran debu dan senyawa lain . Pengeringan ini dilakukan selama 2 hari, dan setelah kering ditimbang.

·      Sortasi kering  dilakukan memisahkan simlplisia dengan debu krikil dan benda lain. Setelah itu sampel ditimbang.

5)   Lengkuas (Languas galanga)

Bahan baku tanaman temulawak diperoleh dari desa Sumber Sari kecamatan Moramo, Konawe selatan. Tanaman ini merupakan tanaman liar yang tumbuh di perkebunan.

·      Pemanenan: pemanenan tanaman lengkuas dilakukan pada pukul 16.00 WITA. Tanaman Lengkuas diambil rimpangnya dengan cara menggali tanah dengan alat besi (linggis dan Cangkul) tanpa menyentuh rimpang tanaman  dan menarik batang tanaman. Rimpang temulawak yang tersisa ditanah diambil dan dikumpulkan.

·      Sortasi basah: sortasi basah dilakukan dengan memisahkan rimpang lengkuas dengan tanah dan bagian rimpang yang busuk.

·      Pencucian: Rimpang dicuci dengan menggunakan air mengalir dan dibersihkan dari tanah yang melekat pada rimpang.

·      Penirisan/pengeringan:Setelah pencucian, bahan langsung ditiriskan di rak-rak pengering. Bahan rimpang penjemuran dilakukan selama beberapa jam. Selesai pengeringan dilakukan kembali penyortiran

·      Perajangan dilakukan dengan memotong atau mengiris iris tanaman dengan ukuran yang sama dan tipis. Perajangan bahan dapat dilakukan secara manual dengan pisau yang tajam dan terbuat dari steinlees ataupun dengan mesin pemotong/perajang.  Bentuk irisan split atau slice.Setelah itu rimpang ditimbang, setengah dari simplisia ini kemudian dikeringkan.

·      Pengeringan rimpang temulawak dilakukan dengan menjemur tanaman dengan menutupi rimpang menggunakan kain hitam. Sehingga tidak terkena langsung dengan sinar matahari dan terhindar dari cemaran debu dan senyawa lain . Pengeringan inidilakukan selama 5 hari, dan setelah kering ditimbang.

·      Sortasi kering dilakukan memisahkan simlplisia dengan debu krikil dan benda lain. Setelah itu sampel ditimbang.

6)   Jambu Biji (Psidium guajava)

Bahan baku tanaman seledri diperoleh dari desa Ponggaluku kecamatan Lainea Konawe selatan. Tanaman ini merupakan tanaman liar yang tumbuh di pekarangan rumah warga.

·      Pemanenan: pemanenan dilakukan pukul 16.00 WITA. Tanaman jambu biji diambil bagian daunnya dengan cara manual yaitu dipetik menggunakan tangan.

·      Sortasi basah: sortasi basah dilakukan dengan memisahkan daun jambu biji yang berlubang-lubang karena dimakan ulat dengan daun jambu yang bagus.

·      Pencucian: Daun dicuci dengan menggunakan air mengalir.

·      Penirisan/pengeringan:Setelah pencucian, bahan langsung ditiriskan di rak-rak pengering. Bahan rimpang penjemuran dilakukan selama beberapa jam. Selesai pengeringan dilakukan kembali penyortiran

·      Perajangan dilakukan dengan memotong atau mengiris iris tanaman menjadi ukuran yang lebih kecil dengan ukuran yang sama. Perajangan bahan dapat dilakukan secara manual dengan pisau yang tajam dan terbuat dari steinlees ataupun dengan gunting.  Bentuk Setelah itu rimpang ditimbang, setengah dari simplisia in kemudian dikeringkan.

·      Pengeringan daun jambu biji dilakukan dengan menjemur  tanaman dengan menutupi menggunakan kain hitam. Sehingga tidak terkena langsung dengan sinar matahari dan terhindar dari cemaran debu dan senyawa lain. Pengeringan ini dilakukan selama 1 hari, dan setelah kering ditimbang.

·      Sortasi kering dilakukan memisahkan simlplisia dengan debu krikil dan benda lain. Setelah itu sampel ditimbang.

3.3.2        Ekstraksi

Ekstraksi dilakukan pada 2 simplisia yaitu simplisia Segar dan simplisia kering.Pembuatan ekstrak seledri menggunakan metode maserasi.simplisiaseledri direndam selama 3x24 jam dengan pelarut metanol. Selama perendaman, campuran ini diaduk setiap 3 jam dalam kurun waktu 24 jam. Kemudian campuran disaring  untuk memisahkan filtrat dan residu. Setelah itu filtrat ekstraksi dipisahkan kembali dengan penguapan menggunakan pompa vakum evaporator pada suhu 68⁰C. Masing masing simplisia diberi perlakuan yang sama.

3.3.3        Penentuan profil Kromatografi Lapis Tipis

Semua  ekstrak sampel basah maupun kering kecuali daun jambu biji dilakukan uji kromatografi lapis tipis (KLT) untuk melihat pola noda senyawa yang terkandung dalam ekstrak menggunakan fasa gerak dengan sistem pelarut yang berbeda-beda. Fasa gerak seledri yaitu etil asetat:metanol:air (10:1:1), jahe (n-heksan:eter (4:6)), temulawak (kloroform:metanol (9:1)), pare (n-heksan:etil asetat (8:2)), lengkuas (toluen:etil asetat (93:7)). Analisis hasil pemisahan KLT menggunakan lampu UV dan pereaksi penampak noda serium sulfat 2% dalam H₂SO₄ 2%.

3.3.4        Penentuan kadar Senyawa Kurkumin

1.      Pembuatan baku kurkumin

Baku kurkumin ditimbang 10 mg dan dilarutkan dalam etanol 100 ml sehingga didapatkan larutan baku 100 ppm. Selanjutnya diambil 5 ml dan diencerkan dengan etanol dalam labu takar 50 ml sampai tanda tera. Divariasikan konsentrasinya 1,2,3,4,5 untuk pembuatan baku standar yang ditambahkan hingga 10 ml didalam tabung reaksi masing-masing. Diukur absorbansinya di spektrofotometri UV-Vis pada λ₄₂₅nm.

2.      Penetapan kadar sampel

Ekstrak temulawak 10 ml dilarutkan dalam etanol 100 ml. diambil 5 ml dan diencerkan dengan etanol dalam labu takar 50 ml. Diukur absorbansinya di spektrofotometri UV-Vis pada absorbansinya pada λ₄₂₅nm.

3.3.5        Penentuan Gugus fungsi Senyawa

1.      Pembuatan Pelet KBr

Ekstrak kental sampel ditambahkan dengan KBr. Campuran tersebut dihomogenkan dengan cara diaduk. Campuran homogen dimasukkan kedalam alat kempa dan dipadatkan menjadi lempengan tipis.

2.      Analisis Kualitatif Menggunakan Spektrofotometer IR

Lempengan tipis sampel diletakkan dalam wadah sampel, dan kemudian dianalis dengan spektrofotometer IR pada bilangan gelombang 4000cm^-1 - 800 cm^-1.